在細胞的生命活動中，RNA結合蛋白（RBP）與RNA的互作如同精密的“分子開關"，調控著mRNA的穩(wěn)定性、翻譯效率及亞細胞定位等關鍵過程。無論是植物應對鹽堿干旱的逆境適應，還是人類疾病中的基因表達異常，這些生命現(xiàn)象的調控機制均與RBP與RNA的動態(tài)互作密切相關。然而，傳統(tǒng)技術如RIP-seq、CLIP-seq受限于抗體質量和通量瓶頸，難以高效解析這類互作網絡。
藍景科信RAP-seq技術：突破傳統(tǒng)的互作研究方案
RNA親和純化測序（RNA Affinity Purification Sequencing, RAP-seq） 是藍景科信自主研發(fā)的創(chuàng)新技術，通過體外重組蛋白表達-RNA親和捕獲-高通量測序的全流程設計，實現(xiàn)了RBP結合RNA的高效鑒定。
技術流程：
1. 重組蛋白制備：體外表達帶標簽（如HaloTag）的目標RBP；
2. RNA親和純化：重組蛋白與總RNA孵育，特異性捕獲互作RNA；
3. 高通量測序和分析：分離結合RNA，構建文庫并測序，解析互作轉錄本。
RAP-seq vs 傳統(tǒng)技術：三大優(yōu)勢
RAP-seq的多維應用場景
l 植物逆境應答：解析RBP在干旱、鹽堿、高溫等脅迫下的調控網絡；
l 發(fā)育生物學：追蹤胚胎發(fā)育、器官分化中的RNA-蛋白互作動態(tài)；
l 疾病機制研究：篩選癌癥、神經退行性疾病中異常表達的RBP及其靶RNA；
l 作物育種：鑒定調控產量、品質的關鍵RBP，輔助分子育種。
應用案例：RAP-seq在植物逆境研究中的應用
案例一：胡楊耐鹽機制的分子解碼
文章標題：Populus euphratica GRP2 Interacts with Target mRNAs to Negatively Regulate Salt Tolerance by Interfering with Photosynthesis, Na+, and ROS Homeostasis
期刊：International journal of molecular sciences
技術應用：利用RAP-seq鑒定胡楊GRP2蛋白結合的mRNA，發(fā)現(xiàn)其通過靶向光合作用相關基因（如PETC、RBCMT）和抗氧化酶基因（SOD[Mn]、CDSP32），抑制耐鹽相關通路，揭示GRP2作為負調控因子的分子機制。
案例二：楊樹耐旱基因的互作網絡解析
文章標題：Rare variations within the serine/arginine-rich splicing factor PtoRSZ21 modulate stomatal size to determine drought tolerance in Populus
期刊：New Phytologist
技術應用：RAP-seq揭示PtoRSZ21蛋白直接結合自噬相關基因PtoATG2的mRNA，通過可變剪接調控氣孔發(fā)育，證明該蛋白通過重塑RNA互作網絡增強耐旱性。
咨詢電話